青島鴻帆凈化設備有限公司為您提供大鼠肺成纖維細胞。一、運輸和保存
1、發送復蘇存大鼠肺成纖維細胞方式:
1存細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態---時。具體操作見細胞培養步驟。
2收到細胞后請拍照,3天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。
2、大鼠肺成纖維細胞接收后的處理:
1收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發給我們。
2請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態,去掉封口膜并將t25瓶置于37℃培養約2-3h。
3棄去t25瓶中的培養基,添加6ml新的完全培養基。
4如果細胞長滿90%以上。
5接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發現污染,請及時與我們取得聯系。
二、細胞培養步驟
1、培養基及培養凍存條件準備:
1準備基礎培養基,北美胎牛血清5%,添加劑1%;雙抗1%。
2培養條件:氣相:空氣,95%;溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
2、細胞處理:
1復蘇細胞:將含有1ml細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4ml培養基混合均勻。在1000rpm條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2ml培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養基,培養過夜。
2細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
3、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1選用原代細胞生長狀態好90-95%,生長數量大于5×105進行傳代。
2吸除原代細胞培養液。用含雙抗的1×pbsph7.4清洗細胞培養瓶2次。
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