大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)
方法：分離大鼠主動脈，直接貼壁于培養(yǎng)皿中，熒光倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，免yi組化ⅷ因子相關(guān)抗原染色鑒定細(xì)胞.結(jié)果:約24小時組織塊邊緣有游離的 新生細(xì)胞長出，7天即融合成片.-傳代后細(xì)胞呈短梭形或三角形，單層生長，鋪路石狀，ⅷ因子表達(dá)陽性，呈指數(shù)增殖.凍存后復(fù)蘇細(xì)胞活性均超過90%.結(jié) 論:用貼壁法成功建立了大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，凍存細(xì)胞存活率高，為體外研究提供了穩(wěn)定的模型.
關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的常見問題
q：培養(yǎng)液到底要不要加雙抗青&鏈？
a：雙抗不是細(xì)胞生長必需的。我們培養(yǎng)細(xì)胞時不常規(guī)使用，因為連續(xù)使用會促進(jìn)耐藥性細(xì)胞株的產(chǎn)生，宜賓細(xì)胞，導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在。一旦將從培養(yǎng)液中去除，這種輕度污染終將發(fā)展成為-污染。具體情況，可根據(jù)自己實驗室的環(huán)境，自行決定是否使用雙抗。
q：細(xì)胞培養(yǎng)，能更換成其它種類的培養(yǎng)基嗎？
a：我們-建議好使用細(xì)胞提供機(jī)構(gòu)或細(xì)胞庫的生長培養(yǎng)液。有些細(xì)胞可能會適應(yīng)在不同培養(yǎng)基中生長，在做好保種的條件下，細(xì)胞培養(yǎng)，可以分出部分細(xì)胞做測試。
q:中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么？
a:基于多年的實驗研究，用于細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛以及其它中可能會存在以下種類的沉淀物：
1纖維蛋白，它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達(dá)到 1-2mm，可以用肉眼觀察到。因為都是在低溫下進(jìn)行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體在處理過程中仍然處于溶解狀態(tài)，當(dāng)經(jīng)過的過濾分裝后，單細(xì)胞測序，就會在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖維蛋白沉淀。
2磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會使出現(xiàn)渾濁，并且在 37℃ 培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點， 這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。
3膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。他們也是中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。
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