達州細胞-南京英瀚斯生物科技-流式細胞檢測結果分析

平板克l隆形成實驗基本步驟::

1、取對數生長期的各組細胞，分別用0.25%胰 蛋白酶---并吹打成單個細胞，---實驗，并把細胞懸浮在10%胎牛的dmem培養液中備用。

2、將細胞懸液作梯度倍數稀釋，每組細胞分別以每皿50、100、200 個細胞的梯度密度分別接種含10ml 37預溫培養液的皿中，并輕輕轉動，使細胞分散均勻。置37團5% co2及飽和濕度的細胞培養箱中培養2~3周。

3、經常觀察，流式細胞檢測結果分析，當培養皿中出現肉眼可見的時，終止培養。棄去上清液，用pbs小心浸洗2次。加4%---固定細胞5ml固定15分鐘。然后去固定液，加適量gimsa應用染色液染10~30分鐘，然后用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥。

4、將平皿倒置并疊加一張帶網格的透明膠片，用肉眼直接計數，或在顯微鏡(低倍鏡)計數大于10個細胞的數。后計算形成率。形成率= (數/接種細胞數) x100%平板形成試驗方法簡單，適用于貼壁生長的細胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞一定要分散得好，不能有細胞團，接種密度不能過大。平板形成試驗方法簡單，適用于貼壁生長的細胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞- -定要分散得好，不能有細胞團，接種密度不能過大。