rna酶rnase是導致rna降解主要的物質。此酶非常穩定,在一些---的條件下只可暫時失活,但---因素去除后又迅速恢---性。常規高溫高壓滅菌方法和蛋白抑制ji不能使所有的rnase完全失活。
1.它廣泛存在于人的皮膚上,因此制備rna時必須戴手套
2.rnase的又一污染源是取液器。根據取液器制造商的要求對取液器進行處理。一般情況下采用以depc配制的70%---擦洗取液器的內部和外部,可基本達到要求。
3. 塑料制品、玻璃和金屬物品的處理
1塑料制品:盡量使用---無菌塑料制品。已標明rnase-free的塑料制品,如沒有開封使用過,通常不必再處理。
動物組織細胞基因組dna提取
操作步驟
1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g0.5cm3,盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中,加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊,轉入1.5ml 離心管中,加入蛋白酶k
500ug/ml20μl,---怎么做,混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min,也可轉入37℃水浴12~24h,間歇振蕩離心管數次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min,取上清液入另
一離心管中。
2.加2倍體積異,倒轉混勻后,可以看見絲狀物,用100ul 吸頭挑出,---多少錢,涼干,用200ul te 重新溶解。可進行pcr反應等,需要進一步純化的按下列步驟進行
3.加等量的酚??振蕩混勻,離心12000 rpm,5min。
4.取上層溶液至另一管,加入等體積的?,振蕩混勻,離心12000 rpm,5min。
5. 取上層溶液至另一管,加入1/2體積的7.5mol/l氨加入2倍體積的無水---,混勻后室溫沉淀2min ,pcr,離心12000 rpm ,pcr引物設計,10min。
6.小心倒掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,將附于管壁的殘余液滴除掉。
7.用1ml 70%---洗滌沉淀物1次,離心12000 rpm , 5min。
8.小心倒掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,將附于管壁的殘余液滴除掉,室溫干燥。
9.加200ul te重新溶解沉淀物,然后置于4℃或?c20℃保存備用。
10.吸取適量樣品于genequant上檢測濃度和純度。
凝膠阻滯遷移電泳檢測服務emsa
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