線粒體測(cè)序
線粒體是真核生物的重要細(xì)胞器，是生物體的能量工廠，參與能量代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡等許多生命活動(dòng)，對(duì)生物的生理活動(dòng)起著---的作用。大部分線粒體基因由于其母系遺傳特性以及進(jìn)化速率較快等特點(diǎn)，被廣泛地用于種群遺傳學(xué)、進(jìn)化生物學(xué)、譜系地理學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育學(xué)、---診斷等學(xué)科領(lǐng)域。線粒體全基因組在生物進(jìn)化的研究中具有的優(yōu)勢(shì)。由于線粒體有著與真核生物長(zhǎng)期共生的進(jìn)化歷史，因此其基因組包含了反映物種進(jìn)化的關(guān)鍵信息，同時(shí)，相對(duì)于核基因組，線粒體基因組小，容易對(duì)大量物種進(jìn)行橫向的比較分析，有利于生物進(jìn)化的研究，因而受到進(jìn)化生物學(xué)家的---。線粒體的組成可以從兩個(gè)層面上反映物種及群體的遺傳和進(jìn)化，即---序列組成和基因組的結(jié)構(gòu)特征，兩者的特征具有不同的進(jìn)化機(jī)制和進(jìn)化速度，fish檢測(cè)，在進(jìn)化生物學(xué)研究中可以---的互補(bǔ)。
注意事項(xiàng)
1. 為了避免蛋白---性，不要對(duì)樣品劇烈攪動(dòng)和反復(fù)凍融。
2. 緩沖溶液成分盡量模擬細(xì)胞內(nèi)環(huán)。。
3. 為了避免蛋白質(zhì)的氧化，將 0.1～1 mmol/ldtt二硫蘇糖醇(或 β-巰加入到緩沖溶液中。
4. 為了避免重金屬對(duì)目標(biāo)蛋白的破壞，四川pcr，將 1～10 mmol/ledta 金屬螯合劑加入。
5. 為了避免微生物生長(zhǎng)，使用滅菌溶液。在純化任何一種蛋白質(zhì)的時(shí)候，均必須時(shí)刻對(duì)它的穩(wěn)定性注意維護(hù)，使它的活性得到保護(hù)，需要牢記如下一些通用的注意事項(xiàng)。
6. 盡可能置于冰上或者在冷庫(kù)內(nèi)進(jìn)行操作。
7. 蛋白濃度不要太稀。
8. 除非是進(jìn)行---層。否則 ph 需要合適，防止所使用的緩沖溶液 ph 與 pi 相同，使蛋白質(zhì)的沉淀得以避免。
9. 使用蛋白酶，避免蛋白酶對(duì)目標(biāo)蛋白的降解；在純化細(xì)胞中的蛋白質(zhì)時(shí)，將 dna 酶加入來(lái)使得 dna 降解，避免 dna 對(duì)蛋白的污染。
全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
全轉(zhuǎn)錄組是指特定組織或細(xì)胞在特定狀態(tài)下所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的總和，包括mrna和各種noncoding rna。我們知道生物體本身的轉(zhuǎn)錄過(guò)程是一個(gè)動(dòng)態(tài)變化且十分復(fù)雜的分子作用網(wǎng)絡(luò)，如果只是對(duì)某個(gè)單一rna分子的研究，有時(shí)并不能準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)分子作用機(jī)制。而競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源rna(cerna)理論闡述了一種全新的轉(zhuǎn)錄調(diào)控模式：cerna包括lncrna、circrna、mrna、假基因等分子能夠通過(guò)mirna應(yīng)答元件microrna respe element， mre競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合相同的mirna來(lái)調(diào)節(jié)彼此的表達(dá)水平。舉個(gè)例子：mirna會(huì)導(dǎo)致基因沉默現(xiàn)象發(fā)生，pcr檢測(cè)，而如果lncrna競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合了mirna，從而影響了mirna基因沉默功能實(shí)現(xiàn)。
cerna是目前轉(zhuǎn)錄調(diào)控領(lǐng)域的---內(nèi)容之一，通過(guò)全轉(zhuǎn)錄組研究能夠系統(tǒng)性的闡述cerna的分子作用機(jī)制。目前對(duì)全轉(zhuǎn)錄組簡(jiǎn)便的方法就是構(gòu)建2個(gè)測(cè)序-分別進(jìn)行測(cè)序。標(biāo)準(zhǔn)的生物信息學(xué)分析能夠得到mrna、lncrna、circrna、mirna各自的研究?jī)?nèi)容，靶向調(diào)控網(wǎng)絡(luò)、cerna網(wǎng)絡(luò)、共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析可以將這幾種rna聯(lián)合起來(lái)分析，從而發(fā)現(xiàn)新的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)模型。去除rrna的鏈特----，含有的rna信息含量十分豐富，通過(guò)測(cè)序和生物信息學(xué)分析能夠得到mrna、lncrna、circrna的鑒定及注釋信息。不過(guò)該-構(gòu)建時(shí)會(huì)進(jìn)行片段化選擇從而濾掉了small rna的信息，所以需要另外再構(gòu)建一個(gè)small rna-，進(jìn)行測(cè)序分析后可以得到mirna和其他small rna的鑒定及注釋信息。全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序方案路線圖如下所示：
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