---液相色譜法(hplc)是上個(gè)世紀(jì)七十年代迅速發(fā)展起來的一項(xiàng)---、快速的分析分離技術(shù)，是現(xiàn)代分離測(cè)試的重要手段。
色譜法的分離原理是：溶于流動(dòng)相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過固定相時(shí)，由于與固定相(station phase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
hplc是在---的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，其以液體作為流動(dòng)相，并采用顆粒極細(xì)的---固定相的柱色譜分離技術(shù)。其分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同，但填料精細(xì)，需高壓泵推動(dòng)，柱效高，分析速度快。
與氣相色譜不同的是液相色譜中流動(dòng)相亦參與組分的分離過程，其組成、比例和ph值可靈活調(diào)節(jié)，分離模式多樣。在實(shí)際操作中主要通過改變流動(dòng)相的組成來調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性，從而使不同樣品得到分離。
---液相色譜法的應(yīng)用范圍十分廣泛，對(duì)樣品的適用性廣，---液相色譜價(jià)格，不受分析對(duì)象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的---，幾乎所有的化合物包括高沸點(diǎn)、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用---液相色譜法分析測(cè)定，---液相色譜多少錢，因而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機(jī)化合物中，可用氣相色譜分析的約占20% ，而80% 則需用---液相色譜來分析。
現(xiàn)代色譜分析法是有效而快速的分離、分析手段，既可用于定性分析，又可用于定量分析。---液相色譜法與氣相色譜法的定性分析和定量分析方法包括測(cè)定方式和計(jì)算方法相同。在定性分析中，有用純物質(zhì)對(duì)照的色譜鑒定法，還有收集餾分與化學(xué)方法或其他儀器分析方法聯(lián)用的非色譜鑒定法；在定量分析中，可以用峰高或峰面積以內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法或歸一化-量，并與微機(jī)聯(lián)用作為現(xiàn)代化的分析工具。
定性分析
色譜分析-性分析的目的就是確定每個(gè)色譜峰代表什么組分，從而確定由這些組分所構(gòu)成的混合物試樣的組成。常用的主要定性方法有色譜鑒定法和非色譜鑒定法兩種。
1．色譜鑒定-性
色譜鑒定法就是用純物質(zhì)對(duì)照定性，這是氣相和---液相色譜法中常用的方便的一種定性方法，可以和定量測(cè)定操作同時(shí)進(jìn)行。
(1)利用保留值定性
在色譜條件一定的情況下包括柱長(zhǎng)、柱內(nèi)徑、固定相、柱溫、流動(dòng)相及流速等，每一種物質(zhì)都有其一定的保留值包括保留時(shí)間、保留體積、調(diào)整保留時(shí)間、調(diào)整保留體積等，一般不受其他組分的影響，---液相色譜，可以作為定性的根據(jù)。此法又稱為純物質(zhì)對(duì)照定性。
在相同的色譜條件下，先測(cè)定未知物中每個(gè)色譜峰的保留時(shí)間或保留距離，再將要測(cè)的某純物質(zhì)注入色譜儀，對(duì)照比較兩者的保留值，如果兩者的保留值相同，就可判定該未知物與已知純物質(zhì)是同一種物質(zhì)。
(2)利用加入純物質(zhì)增加峰高-性
在穩(wěn)定的色譜條件下，為了區(qū)分兩個(gè)保留值保留時(shí)間或保留距離非常接近的組分，可以將某純物質(zhì)直接加入到試樣中，再注入色譜儀，如果某組分峰的峰高增加了，表明這個(gè)色譜峰就是加入的純物質(zhì)。此法又稱為純物質(zhì)追加-性。
色譜鑒定-性需要有純物質(zhì)對(duì)照，在沒有純物質(zhì)時(shí)，可以用非色譜鑒定-性。
hplc是在---的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，其以液體作為流動(dòng)相，并采用顆粒極細(xì)的---固定相的柱色譜分離技術(shù)。其分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同，但填料精細(xì)，需高壓泵推動(dòng)，---液相色譜，柱效高，分析速度快。與氣相色譜不同的是液相色譜中流動(dòng)相亦參與組分的分離過程，其組成、比例和ph值可靈活調(diào)節(jié)，分離模式多樣。在實(shí)際操作中主要通過改變流動(dòng)相的組成來調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性，從而使不同樣品得到分離。
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