低溫研磨樣品能夠有效抑制---降解、保留蛋白質活性。
·分析藥的成分
藥的有效成分的異構體之間常常存在重大區別。低溫研磨可預防分子因壓力和受熱而降解。
·減少樣品揮發
低溫研磨能---減少樣品的揮發,更完整保留樣品成分含量
·研磨韌性/硬性樣品
對于高韌塑料、高強塑料、樹脂等難研磨樣品,低溫研磨可---提高研磨效果及效率
每50~100mg 組織加入0.2體積 trizol
1.加鋼球1顆,設置研磨儀參數:12單位振頻,1min,每種樣品基本充分勻漿
2. 將上述勻漿液每0.2體積 trizol 試劑用量的勻漿液中加入0.04體積氯方,蓋緊管蓋,手動劇烈震搖15 秒鐘,然后室溫靜置2~3 分鐘。
3. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。
4. 小心吸取上層水相無色加入到新試管中,同時計算所吸取的水相體積。不必過多吸取,防止吸入dna和蛋白雜質中間層,白色。
5. 加入所吸取水相等體積預冷的---淳,蓋緊管蓋,輕輕搖勻。
6. 室溫靜置10 分鐘,待rna 充分沉淀為減少rna 降解,此步驟可省略。
7. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。
8. 將上清棄除注意別丟棄沉淀,每管加入0.2體積75%---潤洗,蓋緊管蓋,輕輕晃動試管,以去除殘留的---淳和鹽份。4℃ 7,500g 離心5 分鐘。
9. 將上清棄除注意別丟棄沉淀,打開管蓋,將rna 沉淀干燥室溫揮發或真空干燥。注意rna 沉淀不可完全干燥,否則難以溶解。
10. 將rna 沉淀溶解于適量的無rnase 水中。如果rna 沉淀溶解不完全,將使od260/od280≤1.6。此rna 溶液可用于進一步實驗,或者-70℃保存。
|