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擴增曲線
在real-qpcr中，對整個pcr反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。
在real-timeqpcr擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化，此時即為基線期。
pcr反應過程中產生的dna拷貝數是呈指數形式增加的，隨著反應循環數的增加，終pcr反應不再以指數形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產物已不再呈指數級的增加，pcr的終產物量與起始模板量之間無線---，所以根據終的pcr產物量不能計算出初始模板量。
熒光染料的優點：
產品僅用于科研使用簡便；
可以與任何pcr產物結合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區分不同的雙鏈dna
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特---產物會影響結果的敏感性
引物二聚體和非特---擴增問題可以通過熔解曲線(meltingcurve)進行識別，進而通過pcr引物的設計和反應條件的優化得以解決。總的來說，sybrgreeni方法是一種基礎也的real-timeqpcr實驗手段。
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